Бета-лактоглобулин гені бойынша ПТР-ПДРФ әдісімен маститпен ауыратын сиырларды генотиптеу процесін оңтайландыру

Abstract

Мастит - бұл тіндердегі және сүт безінің секрециясындағы патологиялық өзгерістермен сипатталатын қауіпті желін ауруы. Маститтің этиологиясы, олардың берілу және емдеу механизмдері туралы көптеген жылдар бойы жүргізілген зерттеулер сиырлардың сүт безінің ауруы көптеген сыртқы және генетикалық факторларға байланысты екенін анықтады. Соңғы онжылдықтардағы әлемдік ғылыми зерттеулер маститке қарсы шаралар жүйесінде патогеннің ДНҚ-ның белгілі бір бөлігін анықтауға ғана емес, сонымен қатар ауруға генетикалық төзімділіктің маркерлерін іздеуге, сондай-ақ олардың полиморфизмінің байланысын зерттеуге негізделген ДНҚ диагностикасы әдісі маңызды орын алуы керек екенін көрсетеді. Біз бұл мақалада ПТР реакция қоспасының компоненттік құрамын таңдау және оңтайландыру нәтижелерін келтірдік. Зерттеу нәтижелері бойынша біз реакция қоспасы мен праймерлердің оңтайлы концентрациясын таңдадық: 10хБуфер – 2,5 мкл; MgCl2 (25 мМ) – 2 мкл; dNTP (25 мМ) – 0,2 мкл; праймер F (10 пМ) – 1 мкл; праймер R (10 пМ) – 1 мкл; Taq-полимераза – 0,25 мкл; ДНҚ – 1 мкл; H2O – 25 мкл дейін. Амплификация бағдарламасына мыналар кірді: пре-денатурация 940С – 5 мин, 35 цикл, денатурация 940С – 30 сек, күйдіру 600С – 30 сек, элонгация 720С – 30 сек, пост-репликация 720С – 1 мин, сақтау 40С. ПТР-ПДРФ жүргізу арқылы біз келесі генотиптерді алдық: BLGAA – ұзындығы 148/99 н.ж.; BLGAВ – ұзындығы 148/99/74 н.ж.; BLGВВ – ұзындығы 99/74 н.ж. Осылайша, біз таңдаған ПТР және ПТР-ПДРФ реакциялық қоспасының компоненттік құрамы, сондай-ақ амплификацияның температуралық-уақыттық режимі амплификацияланатын нуклеин қышқылы мен рестрикт өнімінің қажетті мөлшерін жасау үшін оңтайлы болып табылады.